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人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書
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  人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  BS-0279 人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒

  一、實驗目的

  本試劑盒用于定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中B細胞生長因子(BCGF)的濃度。

  二、實驗原理

  采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。微孔板預包被抗BCGF抗體,樣本中的BCGF與包被抗體結合后,加入生物素標記的檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的親和素,經(jīng)TMB底物顯色,顏色深淺與樣本中BCGF濃度成正比。

  三、試劑盒組成

  預包被酶標板(96孔/48孔)

  標準品(2700ng/L)

  標準品稀釋液

  生物素標記抗體

  酶結合物(HRP標記)

  顯色底物A/B液

  終止液

  20×濃縮洗滌液

  封板膜

  說明書

  四、操作步驟

  1. 試劑準備

  將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)30分鐘

  濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍備用

  2. 標準品稀釋

  取6個EP管,每管加150μL標準品稀釋液

  首管加入150μL標準品原液混勻(1800ng/L)

  依次倍比稀釋至2.5ng/L

  3. 加樣

  設空白孔(僅加稀釋液)、標準孔、樣本孔

  每孔加100μL標準品/樣本(建議設復孔)

  37℃孵育90分鐘

  4. 洗滌

  甩盡孔內(nèi)液體,每孔加洗滌液350μL

  靜置30秒后棄去,重復5次

  拍干(勿用吸水紙直接接觸孔底)

  5. 酶標反應

  每孔加100μL生物素標記抗體

  37℃孵育60分鐘

  同法洗滌5次

  6. 顯色反應

  每孔加底物A/B液各50μL(避光操作)

  37℃避光孵育15分鐘

  每孔加終止液50μL終止反應

  7. 檢測

  30分鐘內(nèi)用酶標儀測450nm波長OD值

  繪制標準曲線(OD值 vs 濃度)

  五、注意事項

  試劑使用前需平衡至室溫,避免反復凍融

  不同批號試劑不可混用,有效期前使用

  加樣時間控制在5分鐘內(nèi),推薦使用排槍

  洗滌需干凈,拍干時避免交叉污染

  顯色劑B液避光保存,終止液有腐蝕性

  樣本OD值超出標準曲線范圍時需稀釋重測

  六、結果計算

  以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制標準曲線

  樣本濃度=標準曲線對應濃度×稀釋倍數(shù)

  七、性能指標

  靈敏度:<1號標準品濃度

  線性范圍:2.5-1800ng/L(R2>0.99)

  板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%

  八、樣本要求

  血清:室溫凝固后離心取上清

  血漿:EDTA抗凝,避免溶血

  保存:-20℃可存3個月,避免反復凍融

  (注:具體操作請以實際試劑盒說明書為準)

  注:供科研使用,以上資料供參考,不作為實驗依據(jù),具體請咨詢技術老師是或品牌商。

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