聯系電話：
18502669006
服務熱線： 15502280048
服務熱線： 
魚腫瘤壞死因子a(TNF-a)ELISA檢測試劑盒使用說明書
BS-3794魚腫瘤壞死因子a(TNF-a)ELISA試劑盒
一、實驗原理
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測魚血清、血漿或組織勻漿中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。實驗通過以下步驟實現：
將純化的魚TNF-α抗體包被于微孔板形成固相抗體
加入樣本后，樣本中的TNF-α與固相抗體結合
加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物
經洗滌后加入底物TMB顯色
顯色深淺與樣本中TNF-α濃度呈正相關，通過酶標儀測定吸光度計算含量
二、試劑盒組成
96孔/48孔酶標板(預包被抗體)
標準品(凍干粉，需復溶)
標準品稀釋液
樣本稀釋液
HRP標記檢測抗體
顯色底物A液(TMB)
顯色底物B液
終止液
濃縮洗滌液(20-30倍濃縮)
封板膜
說明書
三、自備器材
酶標儀(450nm波長)
精密移液器及槍頭(0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL)
37℃恒溫箱
洗板機(或手動洗板裝置)
去離子水
離心機(2000-3000rpm)
四、樣本處理
血清樣本
室溫血液自然凝固10-20分鐘
2000-3000rpm離心20分鐘
立即分離血清，避免溶血
分裝保存：-20℃(避免反復凍融)
血漿樣本
使用EDTA/肝素抗凝
3000rpm離心30分鐘
立即分離血漿
分裝保存：-20℃(避免反復凍融)
組織勻漿
組織塊加入生理鹽水搗碎
3000rpm離心10分鐘
取上清液檢測
五、操作步驟
試劑準備?：
標準品：凍干粉加1mL標準品稀釋液復溶，靜置10分鐘后混勻，按說明書進行倍比稀釋
洗滌液：濃縮液用去離子水稀釋(20-30倍)，室溫使用
加樣?：
設空白孔、標準孔、樣本孔
每孔加100μL標準品/樣本
37℃孵育90分鐘
洗板?：
甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液
靜置1分鐘后甩去，重復5次
吸水紙上拍干
加酶標抗體?：
每孔加100μL HRP標記抗體(空白孔除外)
37℃孵育60分鐘
顯色?：
每孔加底物A、B各50μL
37℃避光孵育15分鐘
終止反應?：
每孔加終止液50μL
15分鐘內測定OD值
六、注意事項
試劑保存?：
2-8℃保存，有效期6個月
使用前室溫平衡20分鐘
濃縮洗滌液結晶時，37℃水浴溶解
操作規范?：
不同濃度標準品/樣本使用新槍頭
加樣順序保持一致保證孵育時間相同
顯色底物避光保存，變藍即失效
終止液加入順序與底物一致
質量控制?：
標準曲線R值應≥0.95
批內CV<10%，批間CV<15%
靈敏度通常<1.0ng/mL
七、結果計算
以標準品濃度(ng/mL)為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線
樣本OD值代入標準曲線計算濃度
樣本稀釋倍數需在最終結果中乘以相應系數
八、性能指標
檢測范圍：3-80ng/mL(具體以實際試劑盒為準)
特異性：不與其他細胞因子交叉反應
重復性：板內/板間變異系數符合要求
九、安全提示
終止液含硫酸，操作時注意防護
所有廢棄物按生物危害物處理
實驗過程避免交叉污染
注：以上僅供參考，本產品僅供科研使用，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
天津本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創美好的未來。
