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人白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-9770人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，專用于定量檢測人血清、血漿及相關(guān)生物液體樣本中白細(xì)胞介素17(IL-17)的含量。IL-17是一種由Th17細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子，在自身免疫疾病和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。
二、檢測原理
雙抗體夾心技術(shù)：
預(yù)包被抗人IL-17單抗的微孔板捕獲樣本中的IL-17。
加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
通過TMB顯色反應(yīng)，顏色深淺與IL-17濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定吸光度(OD值)。
三、試劑盒組成
組分規(guī)格(96孔配置)保存條件
酶標(biāo)包被板1×96孔2–8℃
標(biāo)準(zhǔn)品(270ng/L)0.5ml×1瓶2–8℃(長期-20℃)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶2–8℃
酶標(biāo)試劑6ml×1瓶2–8℃
樣品稀釋液6ml×1瓶2–8℃
顯色劑A/B液各6ml×1瓶2–8℃避光
終止液6ml×1瓶2–8℃
濃縮洗滌液20ml×30倍×1瓶2–8℃
說明書1份室溫
四、樣本處理要求
血清/血漿：
室溫靜置10–20分鐘，2000–3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清液
避免反復(fù)凍融，若出現(xiàn)沉淀需再次離心
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
離心后取上清，檢測分泌性成分時需無菌操作
尿液/組織勻漿：
尿液離心后取上清;組織樣本需勻漿后離心分裝
五、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：
梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品(如270ng/L至1ng/L)，每孔加樣50μL
樣本加樣：
樣本稀釋后加10μL至微孔，加樣量40μL(總稀釋度5倍)
溫育：
37℃避光反應(yīng)30分鐘，封板膜覆蓋
洗滌：
洗滌液浸泡1分鐘/次，重復(fù)3–5次，拍干孔內(nèi)液體。
顯色與終止：
加入TMB顯色液避光反應(yīng)15–20分鐘，終止液終止反應(yīng)。
讀數(shù)：
酶標(biāo)儀450nm波長測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。
六、性能指標(biāo)
靈敏度：低至0.1pg/mL(小鼠IL-17參考值) ，人IL-17約3.8pg/mL。
檢測范圍：7.8–500pg/mL(人IL-17C參考值) ，或31.3–2000pg/mL(人IL-17)。
特異性：與IL-17家族其他成員(如IL-17B、IL-17F)無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%
七、注意事項
保存條件：
試劑盒2–8℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品長期存放需-20℃
有效期：
6個月(4℃)，12個月(-20℃)。
實驗環(huán)境：
避免強光照射，顯色液需37℃預(yù)平衡。
八、參考文獻
雙抗體夾心法原理及操作規(guī)范
樣本處理與保存指南
試劑盒性能驗證數(shù)據(jù)
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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