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大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒實驗使用說明書
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  以下是關于大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒的實驗使用說明,綜合了多個來源的可靠信息:

  BS-2970 大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒

  一、實驗原理

  采用雙抗體夾心法檢測樣本中IL-5含量。預包被抗大鼠IL-5抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-5,再依次加入生物素化檢測抗體和HRP標記的鏈霉親和素,形成復合物后通過TMB顯色反應定量。顏色深淺與IL-5濃度成正比,通過標準曲線計算含量?。

  二、試劑盒組成

  核心組分?:預包被酶標板、標準品(凍干粉,需復溶)、生物素化抗體、HRP酶結合物、TMB顯色液、終止液?

  輔助溶液?:20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、樣品稀釋液、標準品稀釋液?

  耗材?:封板膜、密封袋?

  三、樣本處理要求

  血清/血漿?:采集后室溫靜置10-20分鐘,2000-3000g離心20分鐘,避免溶血或脂血干擾?。

  細胞培養上清?:直接離心去除顆粒物,-20℃保存時避免反復凍融?。

  組織勻漿?:PBS沖洗后稱重勻漿,離心取上清,建議添加蛋白酶抑制劑?。

  四、標準操作步驟

  標準品稀釋?:復溶后梯度稀釋(如2000-31.2 pg/mL),建議設置8個濃度點?。

  加樣與孵育?:

  每孔加100μL樣本或標準品,37℃孵育90分鐘

  洗滌5次后加入生物素化抗體(100μL/孔),37℃孵育60分鐘?

  顯色與檢測?:

  加入TMB底物避光顯色15分鐘,終止反應后30分鐘內測定450nm吸光度?。

  五、關鍵注意事項

  質量控制?:每板需設空白孔和標準曲線,OD值需扣除空白背景?。

  干擾避免?:避免使用NaN3防腐劑(抑制HRP活性),溶血/高脂樣本需預處理?。

  保存條件?:未使用的板條需密封干燥保存于2-8℃,標準品復溶后需當日使用?。

  六、性能參數

  檢測范圍?:典型為15.6-1000 pg/mL,靈敏度可達3.9 pg/mL?。

  精密度?:板內/板間變異系數分別<10%

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據,具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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