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牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒實驗使用說明書
以下是牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒的實驗使用說明摘要：
BS-3989 牛熱休克蛋白-70抗體(HSP-70-Ab)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。通過包被抗體捕獲樣本中的HSP-70-Ab，加入HRP標(biāo)記檢測抗體后，經(jīng)TMB顯色反應(yīng)，顏色深淺與目標(biāo)物濃度成正比。
二、試劑盒組成
主要組分?：
預(yù)包被微孔板(96孔)
凍干標(biāo)準(zhǔn)品(通常含2瓶，需用稀釋液 reconstitute 至10 ng/mL)
樣品稀釋液(20mL)
HRP標(biāo)記檢測抗體(120μL，需1:100稀釋)
TMB顯色底物(A/B液分裝)
終止液(2N H2SO4)
自備物品?：
酶標(biāo)儀(450nm濾光片)
微量移液器及吸頭
37℃恒溫箱
三、樣本處理
血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免溶血或反復(fù)凍融。
組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清。
保存?：分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。
四、操作步驟
試劑平衡?：所有組分室溫平衡15-30分鐘。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：從10 ng/mL起始進行倍比稀釋(建議7個梯度)。
加樣與孵育?：
每孔依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品(100μL)、檢測抗體(50μL)，37℃孵育60分鐘。
洗滌?：使用稀釋后的洗滌液(1:25)洗板5次。
顯色?：加入TMB底物，避光反應(yīng)15分鐘。
終止與檢測?：加終止液后30分鐘內(nèi)測450nm OD值。
五、注意事項
濃洗滌液結(jié)晶可37℃水浴溶解。
避免板條開封后受潮，未用完需密封保存。
不同批次試劑不可混用。
高濃度樣本需預(yù)稀釋(計算時乘以稀釋倍數(shù))。
六、結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計算。
注：以上資料僅供參考，具體如需完整說明，建議聯(lián)系供應(yīng)商獲取。
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