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以下是植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明：
BS-7993 植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。預(yù)先包被植物ACC合成酶(ACS)抗體的微孔板中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，TMB底物在過氧化物酶催化下顯色(藍(lán)色→黃色)，顏色深淺與ACS含量呈正相關(guān)，通過450nm波長測定OD值計(jì)算濃度。
二、樣本處理
血清?：無熱原試管采集，避免細(xì)胞刺激，1000×g離心10分鐘分離;
血漿?：EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝，3000×g離心30分鐘取上清;
細(xì)胞上清液?：3000×g離心10分鐘去除顆粒;
組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清;
保存?：分裝凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融。
三、試劑盒組成
組分 規(guī)格 數(shù)量
30倍濃縮洗滌液 20ml 1瓶
酶標(biāo)試劑 6ml 1瓶
酶標(biāo)包被板 12孔×8條 1板
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml 1瓶
顯色劑A/B液 各6ml 各1瓶
終止液 6ml 1瓶
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋原倍標(biāo)準(zhǔn)品;
加樣?：
空白孔：不加樣品
標(biāo)準(zhǔn)孔：50μl標(biāo)準(zhǔn)品
樣本孔：40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋);
溫育?：37℃孵育30分鐘，封板膜覆蓋;
洗滌?：棄液后加滿洗滌液，靜置30秒重復(fù)5次，拍干;
顯色?：每孔加顯色劑A/B液各50μl，37℃避光顯色10分鐘;
終止?：每孔加50μl終止液;
檢測?：5分鐘內(nèi)于450nm讀取OD值。
五、注意事項(xiàng)
試劑盒保存于2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘;
濃縮洗滌液結(jié)晶需水浴加熱溶解;
結(jié)果計(jì)算時(shí)需乘以稀釋倍數(shù)(如5倍);
不同批號(hào)組分不可混用(洗滌液/終止液除外)。
六、自備器材
酶標(biāo)儀(450nm)
移液器(0.5-1000μL范圍)
37℃恒溫箱。
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