ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要
使用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)。
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括：
固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有定影響,般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
除此之外還要注意以下事項(xiàng)：
1.確定ELISA檢測(cè)試劑盒在有效期內(nèi)；
2.仔細(xì)閱讀說明書；
3.按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）；
4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存；
5.根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量；
6.準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；
7.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。
注：以上僅供參考！
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