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　　熒光定量PCR(qPCR)方法用途及說明

　　熒光定量PCR法(qPCR)：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。

　　(經典法)

　　1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質檢。

　　2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

　　3) 廠家可協助完善方法驗證步驟。

　　支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒(一步法)

　　1)適合科研單位檢測，或單位內檢，用熒光定量PCR(qPCR)法檢測細胞或其他生物基質。

　　2) 比藥典操作標準合并了一步，(將內控對照試劑預先混合在PCR mix試劑中)，操作更簡潔。

　　3)樣本量為2μl，靈敏度為50個基因組拷貝/反應。結果準確。

　　優點：

　　①靈敏度高、特異性強。

　　②時間短，2-3小時出結果。

　　③檢測結果可定量。

　　④操作簡便。

　　缺點：

　　①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性。(可用培養法做補充驗證)

　　②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同)，需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

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